在用于分离、纯化、制备复杂样品时，Pilot制备液相色谱因其与传统常压过柱子相比有着明显的优势，近年来在各大实验室得到了越来越广泛的应用。配套采用小粒径填料（5μm，10μm）的三为科学高压制备色谱柱，使用人员可直接利用前期在分析柱上摸索出的合适分离方法进行线性放大，而无需从头开发用于制备的分离方法，节省了方法开发过程中的大量人力物力财力。

       以常用的C18固定相柱为例，为尽可能简化线性放大的调整过程，建议采用与分析柱同样粒径与长度的制备柱。

进样量

三为科学高压制备液相色谱柱的典型进样量为填料装填量（见表1）的0.2%~3%之间。若进样量过小，样品易吸附在柱上难以洗脱；若进样量过大，部分样品可能无法吸附而直接流出。

欲获得制备柱对于某种样品的理论进样量，可根据前期在分析柱上摸索出的分离条件，经计算得出制备柱的进样量：

公式（1）中的分析柱进样量一项可先参考分析柱的最大载量进行尝试。由公式（1）可以看出，当制备柱与分析柱的柱长一致时，可简化计算并一定程度上简化放大操作的摸索、调整过程。

表1 三为科学高压制备液相色谱柱参数一览

*关于柱超载

       由于制备液相色谱与分析液相色谱的目的不同，即制备液相色谱在使用中为提高制备效率，操作过程中时常会涉及到柱超载：质量超载或浓度超载，即保持较小的进样体积，增加样品浓度。一般认为单次处理的样品量较小时可尝试质量超载；体积超载，即保持较小的样品浓度，增加进样体积。一般认为单次处理的样品量较大时可尝试体积超载。

       当涉及柱超载操作时，有以下几点需注意：1、由于样品内不同组分间的相互作用，选择何种超载操作需进行尝试，以获得可以接受的分离效果。2、柱超载程度需按样品实际分离情况及各实验室习惯用法而调整。3、线性放大理论不适用于柱超载操作。

流速

三为科学高压制备液相色谱柱的典型流速范围详见表1。

同理，制备柱的实际流速可根据前期在分析柱上摸索出的分离条件进行大致计算：

公式（2）用于当制备柱与分析柱的填料粒径一致时的情况，调整实际流速时请勿超压。

梯度条件

当分离方法涉及梯度程序时，制备柱的梯度时间可根据分析柱方法的梯度时间进行大致计算：

由公式（3）可以看出，当制备柱与分析柱的柱长一致时，可简化计算并一定程度上简化放大操作的摸索、调整过程。

本文档内所有内容皆为本公司内部试验数据，仅供参考。

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