液相色谱柱的活化操作,以常见的C18反相分析柱为例,出厂时一般都封装有甲醇或乙腈等有机溶剂。随着时间的推移,色谱柱内的有机溶剂缓慢挥发,色谱柱内可能出现气泡。因此,新购买的色谱柱在使用前一般都要进行活化操作。
下面以常见的4.6mm X 150mm, 5μm粒径的C18反相分析柱为例:
1. 在活化色谱柱前,应先用相关试剂冲洗液相系统的流路,确保无污染物残留。切换至封柱试剂(一般为甲醇或乙腈),置换流路内的试剂。
2. 停泵,将分析柱的进液口连上系统,移除出液口的堵头,出液口不连上系统。倾斜放置色谱柱,使其出液口高于入液口。
3. 以0.1ml/min的流速冲洗色谱柱约5分钟,切换至0.2ml/min的流速继续冲洗。观察色谱柱出液口,若连续出液,停泵,将色谱柱出液口接入液相系统。
4. 以0.1ml/min的流速冲洗色谱柱,5分钟内将流速平稳提升至0.5ml/min继续冲洗色谱柱。
5. 以0.5ml/min的流速冲洗色谱柱,期间观察压力与基线是否平稳,直到冲洗的总流量达到30个柱体积。
6. 活化完成。
对于久置不用的类似型号色谱柱,再次使用前也可参考上述步骤进行活化。