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高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法

在我们进行液相色谱分析时,有时会遇到这样一个问题:系统的流路中存在气泡。

由于气泡的存在,会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰,严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定,使基线起伏。

造成上述现象的主要原因有三条:

1.是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;

2.是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净;

3.是在注入样品时不注意混入了空气。

为了避免这类问题的出现,液相色谱实际分析过程中必须重视:

一、对流动相进行脱气处理,常用的脱气方法有以下几种:

1.吹氦脱气法

使用在液体中比空气溶解度低的氦气,在0.1Mpa压力下,以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂,脱气效果较好,但在国内因氦气价格较贵,本法使用较少;

2.加热回流法

此法的脱气效果较好;

3.抽真空脱气法

此时可使用微型真空泵,降压至0.05-0.07MPa即可除去溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化,故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合,以保证混合后的比例不变。

4.超声波脱气法

它是目前实验室使用最广泛的脱气方法,将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便,基本能满足日常分析的要求。

5.在线真空脱气法

把真空脱气装置串联到储液系统中,并结合膜过滤器,实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法,并适用于多元溶剂体系。

二、在液相色谱系统开始工作前,可以用注射器连接恒流泵的排空阀,抽入流动相,将流路中的空气驱赶干净。

三、在注入样品前注意排出样品注射器中的空气。

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